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多管漩涡混合仪在提取DNA过程中的作用松木板材

时间:2020年06月02日

2017-03-21 16:33:39来源: 贤集网

导语:漩涡混合仪利用偏心旋转作用使容器中的液体产生涡旋,从而将所需混合的成分(例如不同液体、液固、粉末等)快速、均匀、彻底地混合。漩涡混合仪巧妙地结合了涡旋和振荡作用,混合过程无需电动搅拌或磁力搅拌,能有效解决传统混合过程存在的混合不均匀、混合过程耗时长、易产生气泡、受到外界污染或磁场作用影响等问题。

现在我正在实验室里提取棉花基因组DNA,这可是一个很苦逼的活,但是不得不认真地去做,因为DNA质量的好坏直接影响到我硕士论文中基因结构和功能研究等分子生物学研究的展开。

在DNA提取过程中要尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,保证DNA的完整性和纯度。目前,植物DNA提取常采用CTAB法。但植物组织的成分复杂,特别是对于富含多酚、多糖以及其它次生代谢产物的植物,传统DNA提取方法难以有效去除这些次生代谢产物,常出现获得的DNA产量低、易降解、质量差等问题,严重的甚至不能用作相关的DNA研究。

老天保佑,这时师兄回来了。师兄的博士论文是联合培养的,做白僵菌孢子基因方面的课题。他的联合培养导师让他在白僵菌孢子DNA的提取过程中,用漩涡混合仪混合法替代了液氮研磨。改进后的提取方法,使得孢子与石英砂涡旋裂解,减少孢子用量,省去研磨过程,解决了研磨法造成孢子飞散等问题,节约了试剂;同时减少了提取时间,减少操作过程中DNA降解的机会。

师兄告诉我:漩涡混合仪利用偏心旋转作用使容器中的液体产生涡旋,从而将所需混合的成分(例如不同液体、液固、粉末等)快速、均匀、彻底地混合。漩涡混合仪巧妙地结合了涡旋和振荡作用,混合过程无需电动搅拌或磁力搅拌,能有效解决传统混合过程存在的混合不均匀、混合过程耗时长、易产生气泡、受到外界污染或磁场作用影响等问题。

目前,漩涡混合仪已被广泛应用到大肠杆菌质粒提取中。利用漩涡混合仪能将溶液与菌体充分混匀,使菌体均匀地分布在高渗透压的环境中,便于菌体进一步的释放。同样的思路,可以将漩涡混合仪用于改进CTAB法提取DNA,通过漩涡混合仪可将PVP40、铜试剂(DIECA)、β-巯基乙醇等试剂与多酚、多糖等物质充分均匀混合,有效降低多酚、多糖等物质的污染,提高DNA提取的完整性和纯度。

在师兄的热心指导下,我将漩涡混合仪用于棉花基因组DNA提取方法的优化,获得了理想效果。DNA琼脂糖电泳实验结果表明:传统CTAB法提取的棉花基因组DNA条带模糊,有拖尾现象;改进的CTAB法(操作步骤中增加了漩涡混合仪混合的步骤)提取的DNA样品条带明晰,没有拖尾降解现象。DNA纯度检测实验表明:传统CTAB法提取的DNA,其A260/A230值在1.03-1.93范围;改进CTAB法提取的DNA,其A260/A230均大于2.0。说明改进CTAB法获得的DNA纯度更高,基本没有多酚、多糖等物质的污染。

莱普特LPD2500多管漩涡混合仪不仅能快速、均匀混合实验样品,减少多酚、多糖等物质对DNA提取的影响,有效提高DNA完整性和纯度;而且一次可处理50个试验样品,大大提高实验操作的效率,加快论文进度。LPD2500多管漩涡混合仪采用微处理器精准控制,利于平行试验的开展,保证平行实验条件的一致性,有效减小试验误差。

众所周知,我们做论文,DNA 的提取与纯化只是分子生物学实验的第一步,DNA 质量的好坏直接关系到后续实验的成败。不同样品的DNA的提取方法有所不同。在提取某些特殊组织的DNA时需要参照文献建立相应提取方法,以获得可用的DNA大分子。特别是对于组织中含有多酚和多糖的样品,应考虑除去多酚和多糖成分,以减少其对DNA提取、PCR反应的抑制作用。我的实验体会是:多管漩涡混合仪能有效降低多酚、 多糖等物质的污染,提高DNA提取完整性和纯度,是DNA提取实验的好帮手!

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